色谱法依据固定相状态主要分为柱色谱、平板色谱及棒色谱三种形式。实验室中，柱层析与薄层层析是常用技术，两者在实际应用中常相互配合。其中，吸附柱色谱利用硅胶作为固定相，其原理基于硅胶与待分离物质之间的物理与化学作用。物理作用主要源自硅胶表面与溶质分子间的范德华力，而化学作用则指硅胶表面的硅羟基与待分离物质间的氢键作用。

吸附柱色谱所用色谱管为内径均匀、下端缩口的硬质玻璃管，下端填充棉花或玻璃纤维，管内填充吸附剂。吸附剂颗粒大小均匀，有助于获得良好的分离效果。通常使用直径在0.07-0.15mm之间的颗粒。色谱柱大小、吸附剂种类与用量以及洗脱流速需依据具体品种规定。

填装吸附剂有两种方法：干法与湿法。干法操作中，吸附剂一次性加入色谱柱内，通过振动均匀下沉，再沿管壁缓慢注入洗脱剂，或在下端连接活塞，先加入适量洗脱剂，旋开活塞缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀湿润并下沉，形成适宜紧度的吸附层。湿法操作中，将吸附剂与洗脱剂混合，搅拌去除气泡，缓缓倾入色谱柱内，加入洗脱剂洗下附着于管壁的吸附剂，确保色谱柱面平整。填装后，加入供试品液。

供试品加入时，通常先将供试品溶于初始洗脱剂，沿色谱管壁缓缓加入，避免吸附剂翻起。或溶于适当溶剂中，与少量吸附剂混匀，使溶剂挥发后呈松散状态，加在已制备好的色谱柱上。若供试品在常用溶剂中不溶，则可与适量吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。

洗脱过程中，通常按洗脱剂洗脱能力大小递增变换洗脱剂的品种与比例，分段收集流出液，直至成分显著减少或不再出现。操作时需保持有充分的洗脱剂留在吸附层上方。分配柱色谱与吸附柱色谱类似，装柱前需将载体与固定液混合，分次移入色谱柱内并用玻棒压紧；供试品可溶于固定液，与少量载体混匀后加在色谱柱上端。洗脱剂需先加入固定液混匀，避免洗脱过程中两相分配的改变。

扩展资料

柱色谱法，又称层析法。是一种以分配平衡为机理的分配方法。色谱体系包含两个相，一个是固定相，一个是流动相。当两相相对运动时，反复多次的利用混合物中所含各组分分配平衡性质的差异，最后达到彼此分离的目的。色谱法从发明到现在已有八十多年的历史。它是纯化和分离有机或无机物的一种方法。