一 淀粉水解试验
细菌对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用,必须靠产生的胞外酶,如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶将大分子物质分解成小单位如糖、氨基酸、甘油与脂肪酸.这些小单位的物质能被细菌吸收和利用.水解过程可通过底物的变化来证明,如细菌水解淀粉的区域,用碘测定不再产生蓝色；水解明胶可观察到明胶被液化；脂肪水解后产生脂肪酸改变培养基的pH,其中的中性红指示剂使培养基从淡红色变为深红色.
将淀粉培养基溶化后,冷至45℃左右,以无菌操作制成平板.取18-24h的纯培养物点于平板上,每皿可点种3-5个菌株,适温培养2-4d,形成菌落后,在平板上滴加卢戈氏碘液,以铺满菌落周围为度,平板成蓝色.如果菌落周围有无色透明圈出现,说明淀粉已经被水解,实验为阳性,否则为阴性.透明圈的大小一般说明水解淀粉的能力.
二 糖发酵试验
单糖发酵管是将葡萄糖,乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白胨水培养基内,使其最终浓度为0.75-1％.并加入一定量酚红指示剂及小倒管,制成单糖发酵管,接种细菌经37℃培养18-24小时,若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄,若能分圆芦解甲酸有CO2和H2等气体形成,小倒管内则聚集有气泡；不分解,则指示剂不变色.
将伤寒杆菌,大肠杆菌按照液体接种方法分别接种于葡萄糖及乳糖发酵管内.置37℃孵箱培养18-24小时.观察结果：由于一些细菌能分解某种糖类产酸,所以培养基中pH下降到7.0以下,在酚红指示剂的显示下,培养基颜色由红变黄.产酸者以“+”表示,如果同时产生气体,则培养基中小倒管内有气泡出现,此乃产酸又产气,以“♁”表示,不分解,则指示剂不变色,用“-”表示.
三 甲基红（M.R）试验
某些细菌如大肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸,继而分解为甲酸、乙酸、乳酸等,使培养基pH值降至4.5以下,加入甲基红指示剂呈红色,此为阳性反应；若产酸量少或产生的酸进一步转化为醇、醛、气体和水等,则培养基的酸碱度仍在pH 6.2以上,加入甲基红指示剂呈现黄色,为阴性反应.
分别将大肠杆菌,产气杆菌接种于两支葡萄糖蛋白胨水培养基中.置37℃培养2-3天取出,分别滴加甲基红试剂2-3滴,混匀,观察结果.大肠杆菌：+,产气杆菌：-.
四 产吲哚（indole）试验
某些细菌如大肠杆菌,变形杆菌等具有色氨酸酶,能分解蛋白胨水培养基中的色氨酸,产生靛基质（无色吲哚）,再与欧立希试剂（对二甲基氨基苯甲醛）反应,形成红色化合物—玫瑰吲哚,即为阳性反应.
分别将大肠杆菌,伤寒杆菌接种于两支蛋白胨水培养基中.置37℃培养2-3天后,每管沿管壁各加欧立希试剂0.5-1ml于培养液面上,待1-2分钟后观察结果：在交界面出现玫瑰红色环即为吲哚试验阳性,无红色环即为阴性.
五 硝酸盐还原试验
硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中,硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨,再由氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中,硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体.能使硝酸盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还原性产物.但硝酸盐还原的过程因细菌不同而异,有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐,如大肠埃希菌；有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮,如假单胞菌等.硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝酸盐.
六 产氨实验（尿素分解实验）
某些细菌如变形杆菌,具有尿素分解酶,能分解尿素而产生氨,氨溶于水变成氢氧化铵,使培养基变碱而呈红色即为阳性.
分别以斜面接种法将变形杆菌,伤寒杆菌接种于两支尿素斜面培养基上.置37℃培养18-24小时.取出观察结果,培养基变为红色,即尿素分解试验阳性,若不变色,即为尿素分解试验阴性.
七 柠檬酸盐利用试验
本试验用于检测细菌利用柠檬酸的能力.细菌利用柠檬酸盐的能力不同,如各种肠细菌可利用柠檬酸为碳源,而大肠埃希氏菌则不利用柠檬酸盐.因此,能否利用柠檬酸盐是一项鉴别性特征.培养基中含有柠檬酸钠时,如将柠檬酸分解为CO2,则培养基中由于有游离钠离子呈碱性,使培养基中酚红指示剂（pH6.8-8.4,黄→红）由淡粉红色变为玫瑰红色以识别之.
将试验菌在斜面上划线接种,适温培养3-5天.若该菌能利用柠檬酸盐,则可在此斜面上生长并将培养基由原来的淡粉红色变为玫瑰红色,此为阳性；颜色不变者为阴性.
八 油脂水解试验
某些细菌能够分泌脂肪酶（胞外酶）,能将培养基中的脂肪水解为甘油和脂肪酸.所产生的脂肪酸,可通过预先加入油脂培养基中的中性红加以指示[指示范围pH6.8（红）～pH8.0（黄）].当细菌分解脂肪产生脂肪酸时,培养基中出现红色斑点.
将装有油脂培养基的锥形瓶置于沸水浴中融化,取出并充分振荡（使油脂均匀分布）,再倾入培养皿中,待凝固后制成平板.翻转平板使底皿背面向上,用记号笔在其背面玻璃上划成两半.一半用于接种金黄色葡萄球菌作为阳性对照菌,另一半用于接种实验菌大肠杆菌或产气肠杆菌.接种时用接种环取少量菌在平板两边各划线接种.将接种完的平板倒置于37℃恒温箱中,培养24h.观察结果时,注意观察平板上长菌的地方,如出现红色斑点,即说明脂肪已被水解,此为阳性反应.
九 接触酶试验
本试验用于检测细菌是否具有接触酶活性.接触酶又称为过氧化氢酶,是一种以正铁血红素作为辅基的酶,能将过氧化氢分解为水和氧.一般好氧细菌与兼性厌氧细菌（除某些链球菌、乳酸杆菌等外）都能产生接触酶,而厌氧细菌不产生接触酶,这是用以区别好氧和厌氧菌的方法之一.
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法.通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色.