细胞集落形成实验，一窥细胞活力的秘密武器

在生物学研究中，细胞集落形成实验是衡量细胞增殖能力的重要工具，通过计算集落形成率，我们能洞察细胞的生长潜力。以下是两种常见实验方法的详尽指南，无论是贴壁细胞的平板集落形成，还是悬浮细胞的软琼脂版图。

一、平板集落形成实验（适用于贴壁细胞）

1. 前期准备: 确保所有工具如6孔板、吸管、枪头等在超净工作台上消毒30分钟，包括血球计数板和基质胶。

2. 步骤一：细胞准备 - 取出贴壁率大于90%的对数生长期细胞，消化离心后，重悬并计数。

3. 步骤二：接种与培养 - 实验分组，每个孔中加入1000个细胞，放入CO2培养箱中静待一周。待肉眼可见集落形成，取出6孔板，先用甲醇固定30分钟，再用0.1%结晶紫染色3分钟，洗净后用数码相机拍摄，光镜下精确计数集落。

二、软琼脂集落形成实验（适用于悬浮细胞）

1. 细胞计数与调整 - 活细胞计数后，调整至1000活细胞/ml的细胞悬液，用20%FBS的DMEM制成。

2. 琼脂糖准备 - 分别用蒸馏水制备1.2%和0.7%的低熔点琼脂糖，高压灭菌后保持在40℃待用。

3. 分层接种 - 将底层和上层琼脂糖与DMEM混合后，分别在6孔板中均匀加入，形成实验组和对照组，确保无气泡，静置凝固。

4. 培养与观察 - 将培养板置于CO2培养箱内，7至10天后，肉眼观察并计数细胞集落。

结果解析

集落的计数基于肉眼可见的细胞团，计算公式为：集落数=每孔集落数总和/孔数，集落形成率则为：集落数/接种细胞总数×100%。

通过这两项实验，我们得以深入理解细胞的增殖动态，为后续研究提供关键数据。每一步骤都严谨细致，只为揭示细胞世界的繁复秩序。