WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上。

再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与相对应的第一抗体特异性结合，之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。

扩展资料：

WB，蛋白质印迹（Western blotting）又称免疫印迹（immunoblotting）,是采用印迹技术将蛋白质转移到膜上，再根据抗原-抗体的特异性结合，检测复杂样品中的某种蛋白的方法，该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

一、蛋白样本提取制备

1 细胞或组织裂解

2 蛋白酶和磷酸酶抑制剂

3 蛋白定量

4 电泳上样样品的准备

二、 电泳

1 PAGE 胶的制备

2 蛋白分子量 Marker

3 阳性对照

4 内参对照

5 上样与电泳

三、 转膜与显色（ Western Blot）

1 胶中蛋白的检测

2 蛋白转膜

3 膜上蛋白的检测：丽春红

4 膜的封闭

5 一抗的孵育

6 二抗的孵育

7 显色

四、常见问题分析与解决方案

五、试剂及缓冲液配方

一、蛋白样本提取制备

蛋白样品制备是 Western Blotting 的第一步，是决定 WB 成败的关键步骤之一。

蛋白提取总体原则与注意事项包括：

1) 尽可能提取完全或降低样本复杂度使得集中于提取目的蛋白（通过采用不同提取方法或选择不同的试剂盒产品）。

2) 保证蛋白处于可以溶解状态（通过裂解液的pH 、盐浓度、 表面活性剂、还原剂等的选择实现）。

3) 提取过程防止蛋白降解、聚集、沉淀、修饰等（全程保证在冰盒中低温操作，加入合适的蛋白酶和磷酸酶抑制剂）。

4) 尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子（通过加入核酸酶或采取不同提取策略）。

5) 样品分装，长期于-80℃中保存，避免反复冻融。